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张兆亮,祝长青,覃建兵.转基因小麦插入突变蛋白的鉴定[J].麦类作物学报,2013,33(3):445
转基因小麦插入突变蛋白的鉴定
Identification of Insertion Mutation Protein of Transgenic Wheat
  
DOI:10.7606/j.issn.1009-1041.2013.03.07
中文关键词:  小麦  蛋白鉴定  新高分子量麦谷蛋白  整合位点  改良方法
英文关键词:Identification of protein  New HMW GS  Integration site  Modified methods
基金项目:国家自然科学基金地区科学基金项目(30960092)。
作者单位
张兆亮,祝长青,覃建兵 (新疆师范大学分子生物学与生物信息研究室新疆乌鲁木齐 830054) 
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中文摘要:
      为研究转基因小麦中插入突变蛋白的编码基因,以转基因小麦B73 6 1和受体小麦L88 6为材料,利用改良方法分离、纯化、回收目的蛋白后进行鉴定。N端测序结果显示,该蛋白N端前五个氨基酸序列(EGEAS)以及部分氨基酸序列与几乎所有高分子量麦谷蛋白亚基(HMW GS)具有100%的同源性;同时,质谱鉴定结果显示,该蛋白的两个得分最高(96和58)的肽段(GGSFYPGETTPPQQLQQR和IFWGIPALLKR)与 1Dx5亚基的同源性达到100%,初步证明该突变蛋白为新的HMW GS。这对外源 1Dx5基因整合位点的确定和外源基因整合规律的研究提供了更多依据。
英文摘要:
      To obtain the coding gene of insertion mutation in glutenin of transgenic wheat, the target protein was isolated, purified, recovered and identified by modified methods with material B73 6 1 and L88 6, transgenic wheat and receptor wheat, respectively. It was showed that the first five amino acid sequence (EGEAS) and partial amino acid sequence in the other parts of the target protein had 100% homology with nearly all HMW GS. Meanwhile, mass spectrometry identification showed that two peptide fragments(GGSFYPGETTPPQQLQQR and IFWGIPALLKR)of the target protein had high score (96 and 58) and 100% homology with 1Dx5. It was preliminarily proved that the mutation in the target protein was a new HMW GS, which provided basis for the confirmation of integration site of exogenous gene 1Dx5 and the study of integration rule of exogenous gene.
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